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電泳加工的另一種--瓊脂糖凝膠電泳


     原理
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作支持介質的一種電泳方法。其分析原理與其他支持物電泳最主要區別是:它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用.
    

  電泳l加工方法

一般的核酸檢測只需要瓊脂糖凝膠電泳就可以;如果需要分辨率高的電泳,特別是只有幾個bp的差別應該選擇聚丙烯酰胺凝膠電泳;用普通電泳不合適的巨大DNA鏈應該使用脈沖凝膠電泳。注意巨大的DNA鏈用普通電泳可能跑不出膠孔導致缺帶。
 
瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂或瓊脂糖作支持介質的一種電泳方法。對于分子量較大的樣品,如大分子核酸、病毒等,一般可采用孔徑較大的瓊脂糖凝膠進行電泳分離。這是我做病毒檢測實驗試劑盒的說明書部分,看是否對你有幫助:
    配制1%的膠進行電泳
1 稱取0.4g瓊脂糖放于錐形瓶中,再量取40ml的0.5×TBE溶液混合,放于微波爐中煮沸,至溶液清徹透明為止,大約需1分40秒。
2 冷卻到60℃時(放于掌心,能感覺到湯但又能忍受。)加2μl核酸染料,搖勻。
3 組裝好制膠器,并調至水平。將膠倒于制膠器中,插好梳子。待40分鐘膠冷卻凝固后,就可放于倒好電泳緩沖液的電泳槽中進行點樣。
4 取5-10μl樣品溶液,加1-2μl 6×loading Dye,混合均勻后進行點樣。每排點樣孔要點一個5μl的Marker。
5 點完后,調電泳儀各參數進行電泳:U:80V;A;200A;T:40min。

電泳加工結束,凝膠成像系統觀察結果。

    做實驗需要注意的一點就是要戴手套操作,保護好自己。像如果用的核酸染料是EB、緩沖液是TAE的話,就要更加小心了,那玩意兒致癌性比較強;像我們用的是GoldViewTM 核酸染料和TAE還不是特別要緊。
    還有就是,這里說的40ml制的一般都是25孔的中膠,你要根據所需要的孔數來按比例調節用量。膠不能制的太厚或者太薄,二者都不利于電泳的。
    煮膠的時候,一定要讓膠完全溶解(拿起來對著光照看,沒有亮亮的小點出現),不然跑出來的膠不好看;煮的時間也不能太長,煮久了對樣品的回收這類的可能有影響的。
 
    電泳不僅運用到工業上起了重大的作用,同時也被用到了生物,化學,醫學等領域!更多咨詢:www.awowwa.cn
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